Polyacrylamide Gel Electrophoresis คืออะไร
Jul 29, 2024โพลีอะคริลาไมด์ เจลอิเล็กโตรโฟรีซิส (PAGE) เป็นเทคนิคที่ใช้กันทั่วไปในชีวเคมี อณูชีววิทยา และเทคโนโลยีชีวภาพ เพื่อแยกและวิเคราะห์ชีวโมเลกุล โดยเฉพาะโปรตีนและกรดนิวคลีอิก โดยขึ้นอยู่กับขนาดและประจุ เทคนิคนี้เกี่ยวข้องกับการใช้เจลเมทริกซ์ที่ประกอบด้วยโพลีอะคริลาไมด์ ซึ่งเป็นสารที่ก่อให้เกิดโครงข่ายที่มีรูพรุนเมื่อเกิดปฏิกิริยาโพลีเมอร์
ในระหว่างการเตรียมเจล โมโนเมอร์อะคริลาไมด์จะถูกผสมกับสารเชื่อมโยงข้าม ซึ่งมักจะเป็นบิส-อะคริลาไมด์ และตัวเริ่มปฏิกิริยาโพลีเมอไรเซชัน จากนั้นเทส่วนผสมนี้ลงในถาดหล่อเจลและปล่อยให้เกิดปฏิกิริยาโพลีเมอร์จนกลายเป็นเจลแข็ง ความเข้มข้นของอะคริลาไมด์จะกำหนดช่วงขนาดของโมเลกุลที่สามารถแก้ไขได้ โดยความเข้มข้นที่ต่ำกว่าเหมาะสำหรับโมเลกุลขนาดใหญ่ และความเข้มข้นที่สูงขึ้นสำหรับโมเลกุลขนาดเล็ก
เมื่อเจลแข็งตัวแล้ว จะวางในแนวตั้งในเครื่องอิเล็กโตรโฟรีซิสซึ่งประกอบด้วยอิเล็กโทรด 2 อิเล็กโทรดที่เชื่อมต่อกับแหล่งจ่ายไฟ เจลจะจมอยู่ในสารละลายบัฟเฟอร์ที่นำไฟฟ้า ตัวอย่างที่มีชีวโมเลกุลที่สนใจ ซึ่งโดยทั่วไปจะผสมกับบัฟเฟอร์บรรจุจะถูกบรรจุลงในหลุมที่ทำในเจล
เมื่อใช้กระแสไฟฟ้า สารชีวโมเลกุลจะเคลื่อนที่ผ่านเมทริกซ์เจล การโยกย้ายเกิดขึ้นเนื่องจากประจุไฟฟ้าที่นำพาโดยชีวโมเลกุลและอันตรกิริยากับเมทริกซ์เจล โมเลกุลที่เล็กกว่าจะเคลื่อนที่ได้เร็วกว่าผ่านรูพรุนของเจล ในขณะที่โมเลกุลที่ใหญ่กว่าจะถูกขัดขวางและเคลื่อนตัวได้ช้ากว่า
หลังจากกระบวนการอิเล็กโทรโฟเรซิส เจลสามารถย้อมด้วยสีย้อมเฉพาะหรือบำบัดด้วยแอนติบอดีเพื่อให้เห็นภาพและตรวจจับชีวโมเลกุลที่แยกออกจากกัน ภาพเจลหรือรูปแบบแถบที่ได้สามารถให้ข้อมูลเกี่ยวกับขนาด รูปร่าง และความอุดมสมบูรณ์สัมพัทธ์ของโมเลกุลในตัวอย่างได้ นักวิจัยมักใช้ PAGE เพื่อระบุโปรตีน วิเคราะห์โปรตีนเชิงซ้อน ประเมินความบริสุทธิ์ของโปรตีน และกำหนดขนาดของชิ้นส่วนกรดนิวคลีอิก